苏ICP备112451047180号-6
急性淋巴细胞白血病实验室检验方案设计
1.急性淋巴细胞白血病的概述
急性淋巴细胞白血病简称急淋，这是一种常见的来源于B或T系淋巴细胞白血病，发病的概率约0.67／10万，骨髓中主要以原始的淋巴细胞和幼稚的淋巴细胞异常增生为主。急淋临床上有一般白血病所具有的特点，其主要特点：①本病多发于儿童及青少年，因此在儿童、青少年的急性白血病类型中以急淋最常见；②很容易发生全身淋巴结和肝及脾的肿大；③骨、关节痛明显，以肢体长骨及关节疼痛为多见，尤其是少儿，有时骨、关节痛表现为游走性；④易侵犯脑膜导致中枢神经系统白血病（central nervous systematic leukemia,CNSL），也称为脑白。
2.病例资料
叶梓晞，女，2岁。两月前不明原因的出现了进行性的面色苍白，无胸闷、胸痛、发热寒战、腹痛腹泻，其母携其至当地医院，查血常规显示红细胞、白细胞减少，予输注红细胞治疗，进行骨髓穿刺后结果提醒急性白血病骨髓象，今为进一步诊疗，于2019年8月10日上午9：00来我科就诊。患者发病以来，睡眠正常，精神健康，大小便正常。
3.检验方案
3.1血常规检验
3.1.1 SYSMEX XN-3000全自动血细胞检测
3.1.1.1检测原理
（1）半导体激光流式细胞术（2）鞘流直流阻抗法
3.1.1.2检验步骤
（1）标本采集：标本采集使用的是负压采血法，医务人员需要准备与条码相符合的采血管，此标本使用到的为紫色抗凝管，抗凝剂为（EDTA-K2）。采集量为2ml左右，采集好的标本，需要立即送检，并2小时内完成检测 。
（2）样本分析：正常情况下分析标本，将标本上下颠倒混匀后放入标本支架放进右侧进样槽。标本支架开始自动传递，条形码读取器将读取样品信息，从主计算机获取分析指令信息，并开始分析。
注意事项：
（1）注意仪器是否能正常运行、试剂是否足够并注意实际的保质期、更换新的批号试剂要做好登记。废液桶是否装满记得及时清理。
（2）检查标本是否与条码的检验目的相符合、血量是否符合要求、标本是否有凝块、如标本不合格应拒收。
3.1.1.3结果（附录 图1）
（1）血常规： WBC：8.79×109/L、 LY#：7.61×109/L、LY:0.866 、NE#：1.09×109/L、NE：0.124、MONO#：0.07×109/L、MONO：0.008、 EO#：0.01×109/L、 EO：0.00 、BASO#：0.01×109/L、BASO：0.001 RBC：3.40×129/L、HBG：96.00g/L、 HCT：0.275、 MCV：80.90fl、MCH：28.20pg 、MCHC：349.00g/L、 RDW-CV：14.5%、 RDW-SD：42.20fL 、NRBC%：0.00% 、NRBC#：0.00×109/L、PLT：120×109/L、MPV：9.20Fl 、PCT：0.11%、PDW：8.80%、P-LCR：19.60% 。
3.1.2手工白细胞分类计数
正常情况下分析标本，将标本上下颠倒混匀后放入标本支架放进左侧进样槽。标本支架开始自动传递，并开始自动推片。推片完成后瑞氏染色在显微镜的油镜下观察分类计数。
3.1.2.1结果
共计数100个细胞，①中性粒细胞占3%。其中中性中幼粒细胞占了1%，中性分叶核粒细胞占了2%。②淋巴细胞占97%，其中成熟的淋巴细胞占67%,幼稚的淋巴细胞占27%,原始的淋巴细胞占3%。
3.1.3分析（附录图2）
白细胞的数量正常，淋巴细胞的比例增高，原、幼稚淋巴细胞比例增高。粒细胞比例降低，部分的细胞胞浆里面可以见中毒颗粒。成熟的红细胞形状大小不一致。血小板降低，不均匀的分散在涂片中，形状基本上是正常的。
3.2骨髓片检测
3.2.1骨髓细胞化学染色
（1）过碘酸-雪夫反应（PAS）
（2）过氧化酶染色（POX）
（3）NAP染色
3.2.2检验步骤
（1）标本采集：患童仰卧，助手站在患者头侧，用胳膊完全夹紧于儿童，双手稳住双腿，穿刺的侧小腿稍微向外翻。医生站在穿刺部位对面，用手摸胫骨粗隆，选择一个合适的穿刺点，穿刺戴无菌手套以及儿童对于胫骨结节垂直方向居中准确，局部麻醉。由胫骨粗隆下1cm前内侧骨沿垂直骨骼表面的相反方向进针刺入；吸取足够量的骨髓液，消毒棉球压迫拔针。
（2）骨髓片的制备：把针管里面的骨髓液滴在洁净的玻片上，然后用推片蘸上骨髓液，让推片和玻片成45度夹角，从上往下，匀速地向前推进。将制备好的骨髓片进行染色与阅片。
（3）染色步骤：
过碘酸-雪夫反应（PAS）：①将骨髓片用95%乙醇固定10分钟。②10g/L过碘酸液作用20分钟。③DH2O洗涤几次，晾干。④Schiff染液，60分钟。⑤用自来水洗涤15分钟（细水长流冲洗）。⑥苏木素染液10分钟。⑦细细的水流冲15分钟，冲完以后风干，显微镜下观看。
过氧化酶染色（POX）：①在骨髓片上滴加复方联苯胺染液3～8滴，使它盖满整块骨髓片。②2分钟后加入3～8滴过氧化氢溶液。③细细的水流冲10分钟，冲完以后风干，显微镜下观看。
NAP：①将干燥涂片滴加固定液30秒，水洗待干。②将ⅰ液置入ⅱ液溶解混合均匀成为固定基质液。将骨髓片放入后。在37℃温度下放置30分钟，然后用细细的水流冲几分钟，冲完以后风干。③最后用苏木素复染1～2分钟后，细细的水流冲几分钟，冲完以后风干，显微镜下观看。
3.2.3结果和分析
3.2.3.1结果（附录图3）
（1）计数：共计数200个有核细胞。①中性粒细胞占1.5%,其中中性中幼粒细胞占1%,中性，分叶核粒细胞占0.5%；嗜碱性粒细胞占0.5%②淋巴细胞占98%,其中原始淋巴细胞占5%,成熟的淋巴细胞占0.5%，幼稚的淋巴细胞占92.5%
（2）染色：①PAS：原、幼稚细胞呈颗粒状阳性反应，积46分，阳性率为23%。②POX：原、幼稚细胞呈阴性反应。③NAP：成熟的中性粒细胞很少见，所能见的细胞+++。
3.2.3.1分析
（1）骨髓片：①取材满意，涂片及染色良好。②增生极度活跃，有核细胞分类主要以原始的淋巴细胞和幼稚的淋巴细胞为主，这种细胞体积大小不同，以小细胞为主，呈圆形，类圆形；胞浆的量特别少，只有部分细胞像裸核；核圆形或类圆形，容易看见凹陷，折叠，有明显切迹感；染色质较粗，结构较一致，核仁小，显隐不一，多隐匿。见少量退化细胞。③粒系、红系极为少见。④全片没有看见巨核细胞，血小板偶尔能见到几个。
（2）意见：ALL骨髓象。
4.结论
通过选择急性淋巴细胞白血病的检测作为毕业设计的题目，急性淋巴细胞白血病是一种来源于淋巴细胞的常见白血病，以儿童及青少年好发，本例方案中所检测的患者最终临床诊断为典型的急性淋巴白血病患者。患者2岁，因无诱因出现进行性面色苍白到医院进行检查，血常规血象结果主要提示为淋巴细胞比例增高，见少量原幼淋巴细胞；粒细胞比例减低，部分细胞胞浆里面可以看见中毒颗粒，符合急淋的血象。通过对骨髓分类计数并进行过碘酸-雪夫反应（PAS）、过氧化酶（POX）染色和中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色检测，支持原、幼稚细胞为淋巴细胞系。骨髓结果显示：骨髓增生极度活跃，有核细胞分类以原始及幼稚淋巴细胞为主，根据临床症状及实验室结果，该患者符合临床诊断为急性淋巴白血病，如进一步明确诊断可做基因检测，流式细胞检测等。
主要参考文献
[1]龚道元，张纪元.临床检验基础[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.
[2]许文荣，王建中.临床血液学检验.[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2012.
[3]陈方平.临床检验血液学[M].北京:高等教育出版社.2016.
1.急性淋巴细胞白血病的概述
急性淋巴细胞白血病简称急淋，这是一种常见的来源于B或T系淋巴细胞白血病，发病的概率约0.67／10万，骨髓中主要以原始的淋巴细胞和幼稚的淋巴细胞异常增生为主。急淋临床上有一般白血病所具有的特点，其主要特点：①本病多发于儿童及青少年，因此在儿童、青少年的急性白血病类型中以急淋最常见；②很容易发生全身淋巴结和肝及脾的肿大；③骨、关节痛明显，以肢体长骨及关节疼痛为多见，尤其是少儿，有时骨、关节痛表现为游走性；④易侵犯脑膜导致中枢神经系统白血病（central nervous systematic leukemia,CNSL），也称为脑白。
2.病例资料
叶梓晞，女，2岁。两月前不明原因的出现了进行性的面色苍白，无胸闷、胸痛、发热寒战、腹痛腹泻，其母携其至当地医院，查血常规显示红细胞、白细胞减少，予输注红细胞治疗，进行骨髓穿刺后结果提醒急性白血病骨髓象，今为进一步诊疗，于2019年8月10日上午9：00来我科就诊。患者发病以来，睡眠正常，精神健康，大小便正常。
3.检验方案
3.1血常规检验
3.1.1 SYSMEX XN-3000全自动血细胞检测
3.1.1.1检测原理
（1）半导体激光流式细胞术（2）鞘流直流阻抗法
3.1.1.2检验步骤
（1）标本采集：标本采集使用的是负压采血法，医务人员需要准备与条码相符合的采血管，此标本使用到的为紫色抗凝管，抗凝剂为（EDTA-K2）。采集量为2ml左右，采集好的标本，需要立即送检，并2小时内完成检测 。
（2）样本分析：正常情况下分析标本，将标本上下颠倒混匀后放入标本支架放进右侧进样槽。标本支架开始自动传递，条形码读取器将读取样品信息，从主计算机获取分析指令信息，并开始分析。
注意事项：
（1）注意仪器是否能正常运行、试剂是否足够并注意实际的保质期、更换新的批号试剂要做好登记。废液桶是否装满记得及时清理。
（2）检查标本是否与条码的检验目的相符合、血量是否符合要求、标本是否有凝块、如标本不合格应拒收。
3.1.1.3结果（附录 图1）
（1）血常规： WBC：8.79×109/L、 LY#：7.61×109/L、LY:0.866 、NE#：1.09×109/L、NE：0.124、MONO#：0.07×109/L、MONO：0.008、 EO#：0.01×109/L、 EO：0.00 、BASO#：0.01×109/L、BASO：0.001 RBC：3.40×129/L、HBG：96.00g/L、 HCT：0.275、 MCV：80.90fl、MCH：28.20pg 、MCHC：349.00g/L、 RDW-CV：14.5%、 RDW-SD：42.20fL 、NRBC%：0.00% 、NRBC#：0.00×109/L、PLT：120×109/L、MPV：9.20Fl 、PCT：0.11%、PDW：8.80%、P-LCR：19.60% 。
3.1.2手工白细胞分类计数
正常情况下分析标本，将标本上下颠倒混匀后放入标本支架放进左侧进样槽。标本支架开始自动传递，并开始自动推片。推片完成后瑞氏染色在显微镜的油镜下观察分类计数。
3.1.2.1结果
共计数100个细胞，①中性粒细胞占3%。其中中性中幼粒细胞占了1%，中性分叶核粒细胞占了2%。②淋巴细胞占97%，其中成熟的淋巴细胞占67%,幼稚的淋巴细胞占27%,原始的淋巴细胞占3%。
3.1.3分析（附录图2）
白细胞的数量正常，淋巴细胞的比例增高，原、幼稚淋巴细胞比例增高。粒细胞比例降低，部分的细胞胞浆里面可以见中毒颗粒。成熟的红细胞形状大小不一致。血小板降低，不均匀的分散在涂片中，形状基本上是正常的。
3.2骨髓片检测
3.2.1骨髓细胞化学染色
（1）过碘酸-雪夫反应（PAS）
（2）过氧化酶染色（POX）
（3）NAP染色
3.2.2检验步骤
（1）标本采集：患童仰卧，助手站在患者头侧，用胳膊完全夹紧于儿童，双手稳住双腿，穿刺的侧小腿稍微向外翻。医生站在穿刺部位对面，用手摸胫骨粗隆，选择一个合适的穿刺点，穿刺戴无菌手套以及儿童对于胫骨结节垂直方向居中准确，局部麻醉。由胫骨粗隆下1cm前内侧骨沿垂直骨骼表面的相反方向进针刺入；吸取足够量的骨髓液，消毒棉球压迫拔针。
（2）骨髓片的制备：把针管里面的骨髓液滴在洁净的玻片上，然后用推片蘸上骨髓液，让推片和玻片成45度夹角，从上往下，匀速地向前推进。将制备好的骨髓片进行染色与阅片。
（3）染色步骤：
过碘酸-雪夫反应（PAS）：①将骨髓片用95%乙醇固定10分钟。②10g/L过碘酸液作用20分钟。③DH2O洗涤几次，晾干。④Schiff染液，60分钟。⑤用自来水洗涤15分钟（细水长流冲洗）。⑥苏木素染液10分钟。⑦细细的水流冲15分钟，冲完以后风干，显微镜下观看。
过氧化酶染色（POX）：①在骨髓片上滴加复方联苯胺染液3～8滴，使它盖满整块骨髓片。②2分钟后加入3～8滴过氧化氢溶液。③细细的水流冲10分钟，冲完以后风干，显微镜下观看。
NAP：①将干燥涂片滴加固定液30秒，水洗待干。②将ⅰ液置入ⅱ液溶解混合均匀成为固定基质液。将骨髓片放入后。在37℃温度下放置30分钟，然后用细细的水流冲几分钟，冲完以后风干。③最后用苏木素复染1～2分钟后，细细的水流冲几分钟，冲完以后风干，显微镜下观看。
3.2.3结果和分析
3.2.3.1结果（附录图3）
（1）计数：共计数200个有核细胞。①中性粒细胞占1.5%,其中中性中幼粒细胞占1%,中性，分叶核粒细胞占0.5%；嗜碱性粒细胞占0.5%②淋巴细胞占98%,其中原始淋巴细胞占5%,成熟的淋巴细胞占0.5%，幼稚的淋巴细胞占92.5%
（2）染色：①PAS：原、幼稚细胞呈颗粒状阳性反应，积46分，阳性率为23%。②POX：原、幼稚细胞呈阴性反应。③NAP：成熟的中性粒细胞很少见，所能见的细胞+++。
3.2.3.1分析
（1）骨髓片：①取材满意，涂片及染色良好。②增生极度活跃，有核细胞分类主要以原始的淋巴细胞和幼稚的淋巴细胞为主，这种细胞体积大小不同，以小细胞为主，呈圆形，类圆形；胞浆的量特别少，只有部分细胞像裸核；核圆形或类圆形，容易看见凹陷，折叠，有明显切迹感；染色质较粗，结构较一致，核仁小，显隐不一，多隐匿。见少量退化细胞。③粒系、红系极为少见。④全片没有看见巨核细胞，血小板偶尔能见到几个。
（2）意见：ALL骨髓象。
4.结论
通过选择急性淋巴细胞白血病的检测作为毕业设计的题目，急性淋巴细胞白血病是一种来源于淋巴细胞的常见白血病，以儿童及青少年好发，本例方案中所检测的患者最终临床诊断为典型的急性淋巴白血病患者。患者2岁，因无诱因出现进行性面色苍白到医院进行检查，血常规血象结果主要提示为淋巴细胞比例增高，见少量原幼淋巴细胞；粒细胞比例减低，部分细胞胞浆里面可以看见中毒颗粒，符合急淋的血象。通过对骨髓分类计数并进行过碘酸-雪夫反应（PAS）、过氧化酶（POX）染色和中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色检测，支持原、幼稚细胞为淋巴细胞系。骨髓结果显示：骨髓增生极度活跃，有核细胞分类以原始及幼稚淋巴细胞为主，根据临床症状及实验室结果，该患者符合临床诊断为急性淋巴白血病，如进一步明确诊断可做基因检测，流式细胞检测等。
主要参考文献
[1]龚道元，张纪元.临床检验基础[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.
[2]许文荣，王建中.临床血液学检验.[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2012.
[3]陈方平.临床检验血液学[M].北京:高等教育出版社.2016.