预处理方法对冷榨花生粕蛋白质制取活性多肽的影响

预处理方法对冷榨花生粕蛋白质制取活性多肽的影响

摘要

研究了不同预处理温度和预处理时间对低温冷接花生糖自质酶促制备括性多肽及多肽体外抗氧化的影响。研宄结果表明，最佳热处理条件：在相同温度和时间预处理的条件下，蛋白质制取的多肽活性随温度的上升和时间的变长而上升，但在温度上升到一定的程度，多肽活性岁温度的上升而下降，且多肽活性在90℃附近，温度在30—35℃条件下，活性最高。而提取率最高时作用时间为30min，刚开始曲线斜率不断变大，提取率逐渐上升，这是因为反应刚开始，蛋白酶的浓度最高，活性也最高。酶解物对羟自由基的清除率随温度的升高而逐渐增大，在温度为90℃时达到最高值。因此选择的最适酶解温度为30℃。酶解时间为30min时，酶解物显示出最强的羟自由基清除作用，其清除率为59.33%。随着时间的延长，酶解物清除羟自由基的能力却明显下降。

关键词:低温冷榨花生粕；酶法水解；冷榨花生粕；多肽

1. 引言 - 1 -

1.1 花生及花生粕资源概况 - 1 -

1.1.1 花生资源概述 - 1 -

1.1.2 花生粕资源概况 - 1 -

1.2 花生粕及花生蛋白的组成及营养 - 1 -

1.2.1 花生粕的组成及营养 - 1 -

1.2.2 花生蛋白的组成及营养 - 2 -

1.3 花生粕和花生蛋白的用途及发展 - 3 -

1.3.1 花生粕的用途 - 3 -

1.3.2 花生蛋白的应用 - 4 -

1.4 花生粕的研究及利用现状 - 6 -

1.5 本课题研究的意义 - 7 -

2．材料和方法 - 8 -

2.1 材料 - 8 -

2.1.1 供试材料 - 8 -

2.1.2 主要试剂 - 8 -

2.1.3 主要仪器 - 8 -

2.2 试验方法 - 8 -

2.2.1 蛋白质酶解工艺 - 8 -

2.2.2 总蛋白质测定凯氏定氮法测定 - 9 -

2.2.3 多肽含量的测定 - 9 -

2.2.4 水解度的测定 - 9 -

2.2.5 游离氨基氮含量测定用甲醛滴定法，测定过程如下： - 9 -

2.2.6 水解度（Degree of hydrolysis，DH%）的计算 - 9 -

2.2.7 酶解液对O2–·清除效果的测定 - 9 -

2.2.8 清除羟自由基(·OH)的测定方法 - 9 -

3 结果与分析 - 10 -

3.1 不同温度热预处理对酶解多肽含量的影响 - 10 -

3.2 肽的测定 - 10 -

3.3 酶解液对O2–清除效果的测定 - 11 -

3.4 不同预处理时间酶解液对清除羟自由基(·OH)的测定的影响 - 12 -

4.结论 - 13 -

参考文献 - 14 -

致谢 - 16 -

结论

花生蛋白酶解前经 60-90℃处理后，水解度先随着温度的上升而逐渐增大，产生以上结果的原因可能是蛋白质分子本身具有致密的立体结构有碍于蛋白酶与底物的结合，经过适当的热处理可破坏S-S键，使部分缠绕结构打开变的松散，从而暴露原来包埋在分子内部的作用位点即活性基团，更有利于酶的攻击，进而增加蛋白质与酶之间的交互作用，使酶的水解更易进行，蛋白水解度随之增高。但随着温度的继续上升，分子间疏水相互作用增强，SH 被氧化重新生成 S-S，松散的多肽链重新结合形成致密的网状构酶催化的位点又被包埋，阻碍了酶对蛋白质的水解作用，因此蛋白水解度急剧下降。蛋白质热变性对其结构的影响存在两个方面：一是引起活性基团暴露，增加蛋白质与酶之间的交互作用；二是因疏水相互作用或 SH 氧化生成 S-S 导致致密的网状结构形成，酶催化的位点反而被包埋，因此热处理对蛋白酶解性质的影响是变性引起肽键的暴露以及聚合引起肽键的掩蔽两者综合作用的结果。

而提取率最高时作用时间为30min，刚开始曲线斜率不断变大，提取率逐渐上升，这是因为反应刚开始，蛋白酶的浓度最高，活性也最高，因此反应速度最快；随着反应的进行，在30min后，提取率则逐渐下降，因为可参加反应的酶量减少，活性下降，反应速度放缓直至蛋白酶完全失活，反应几乎停顿，表现为水解度几乎不再增加，由于时间的延长降低了劳动效率。

酶解物对羟自由基的清除率随温度的升高而逐渐增大，在温度为90℃时达到最高值。因此选择的最适酶解温度为30℃。酶解时间为30min时，酶解物显示出最强的羟自由基清除作用，其清除率为59.33%。随着时间的延长，酶解物清除羟自由基的能力却明显下降。

在相同温度和时间预处理的条件下，蛋白质制取的多肽活性随温度的上升和时间的变长而上升，但在温度上升到一定的程度，多肽活性岁温度的上升而下降，且多肽活性在90℃附近，温度在30—35℃条件下，活性最高。

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