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急性早幼粒细胞白血病M3实验室检验方案设计
1.概述
急性早幼粒细胞白血病(M3）是一种较常见、临床表现较凶险的急性髓细胞白血病（AML）。骨髓和其它造血组织中的大量的白血病细胞增殖和无限期进入外周血，正常血细胞被显著抑制。病因尚不完清除，主要的致病因子可能有病毒、辐射、化学毒物（苯等）、药物及基因等。急性早幼粒细胞白血病M3实验室检验项目主要包括血液检验，骨髓检验，染色体检查，基因检查，细胞遗传学等检验。
2.病例资料
高某某，女性，38岁，汉族，已婚，湖南衡阳人。患者于2019年3月7日早上开始出现发热，无明显诱因出现发热，发热前有畏寒，寒战，最高体温42℃ (具体热型不详）伴头晕，乏力，食纳差。自诉病史中有大便表面附有鲜红色血，质软，尚成型。小便量较平日减少。于2019年3月10日11:06就诊我院住院治疗，入院精神差，头晕，乏力，贫血面容，脸色苍白、容易疲倦、高烧易怒、虚弱无力、呼吸短促、头晕目眩、没有食欲，查体合作。全身皮肤粘膜未见黄染，右手背有-4cm～5cm的暗红色瘀斑，全身浅表淋巴结未触及肿大。临床初诊为血液系统疾病，中度贫血。
3.检验方案
3.1选择仪器与试剂  显微镜、医用采血针，酒精棉球，载玻片，血推片，消毒牙签，无菌骨髓穿刺包、75%酒精、2%碘酒、2%利多卡因、日本Sysmex希森美康 XN-9000全自动模块式血液体液分析仪及Sysmex配套试剂。
3.2血液自动分析仪检测血常规
3.2.1血液标本采集  采取患者静脉血液2ml于EDTA-K2抗凝短紫管，立即检验。
3.2.2血液外观检验  观察标本量的多少、其有无凝血，溶血，脂血等情况。
3.2.3血液自动分析仪检测原理
流式细胞计数法主要是检测其它生物颗粒和细胞的理化性质。前向散射光的强度主要反映血细胞的体积的大小和侧散射光主要反映细胞内的信息（如细胞核的大小）强度。侧向荧光，当光被照射到了荧光染色的血细胞，产生比入射光波更长的光。染色团的浓度增加，荧光强度也增加。
3.2.4血液自动分析仪检测流程（严格按照仪器说明书操作）  1.标本准备：EDTA-K2抗凝静脉血2ml，外周血适合预稀释自动血细胞分析仪。2准备仪器：（1）接通电源，打开血细胞分析仪开关。（2）仪器进入自动检测系统。自动检测各系统参数同时测定本底参数。当仪器窗口出“ready.no:1”说明仪器处于待测标本状态，可测定血常规标本。（3）打开电脑和打印机，连接数据接口，(4)检测质控物：使用高、中、低值质控物进行室内质控。确定各项目检测结果在允许范围内，才能检测临床标本，若失控，需重新定标。
3.2.5血液自动分析仪检测（报告单附后）
白细胞总数：19.09× 10⁹/L，红细胞：2.13×10¹²/L
血红蛋白:69.00g/L
血小板:59.00× 10⁹/L
中性粒细胞绝对值及百分比:16.28× 10⁹/L， 85.30%
淋巴细胞绝对值及百分比：1.66× 10⁹/L ，8.70%
3.3显微镜白细胞分类计数
3.3.1瑞氏染色原理
   瑞氏染液是酸性伊红和碱性亚甲蓝形成的复合染液。细胞的染色同时具有物理吸附和化学亲和力。各种血细胞不同成分与不同的染液亲和力不同而染成不同的颜色。
3.3.2血涂片的制作与染色  取一滴血液，滴于载玻片上的一侧，持另一片推玻片与载玻片保持45°进行推片，平稳推至载玻片另一端，室温干燥，加适量瑞特染料的覆盖血膜染色1分钟，再加磷酸盐缓冲液等量的，与耳吸球混合，染料为约6分钟，漂洗用自来水染料溶液，等待干显微镜。
3.3.3镜检方法  低倍镜观察血涂片全片及染色情况，找到血涂片体尾交界处染色良好的部分，油镜下计数100个白细胞，并分类计数。
3.3.4显微镜白细胞分类计数结果
早幼粒细胞百分比         80.00%
中性中幼粒细胞百分比     5.0%
中性晚幼粒细胞百分比     4.0%
中性杆状核细胞百分比     2.0%
中性分叶核细胞百分比     1.0%
淋巴细胞百分比           7.0%
成熟单核细胞百分比       1.0%
白细胞数增多，可见大量病态早幼粒细胞，血小板减少，成熟红细胞的形态染色大致正常.
3.4.骨髓片的制作与染色  通过骨髓穿刺术在髂后取0.1～0.2ml红骨髓进入注射器内，取下穿刺针，骨髓推于玻片，快速推5～6张骨髓片后室温干燥，加适量的瑞氏染料覆盖血膜染色1分钟，再加等量的磷酸盐缓冲液，并用吸耳球混匀，染色6分钟左右，用流水冲洗染液，待干镜检。
3.4.1镜检方法  先在低倍镜下找到细胞分布均匀的区域，观察骨髓片中有核细胞的增生情况，估计有核细胞增生程度。然后分类记数100～200个有核细胞，计算各类有核细胞的比例，描述血小板的数量以及分布情况，红细胞的形态。计算粒、红比值；观察有无其他特殊细胞及寄生虫。
3.4.2骨髓片阅片结果
(1)取材，涂片，染色良好;小粒++。
(2)骨髓增生明显活跃，粒:红=191. 00:1.
(3)粒系异常增生，以病态早幼粒细胞为主，其异常形态特点为:胞体较小，圆或类圆形，浆量丰富，可见内外浆，浆内可见细小颗粒，偶见柴捆细胞，核较大，不规则，核染色质细致,核仁多模糊不清。
(4)红系增生减低.
(5)淋巴、单核细胞形态大致正常。
(6)全片中见巨核细胞1个，血小板减少。
4. 结果分析
（1）技术操作规范、正确，仪器正常，质控结果相符。
（2）该患者白细胞总数、早幼粒细胞增多，可见大量病态早幼粒，淋巴细胞明显下降，显微镜分类计数与仪器分类计数结果不相符，因为血液自动分析仪不能准确识别幼稚细胞。
（3）特殊染色. POX:病态早幼粒呈强阳性，AD-DCE:病态早幼粒呈阳
性，ANAE:病态早幼粒呈阴性，ANAE+NaF:病态早幼粒呈阴性。 
5.结论  选择M3患者作为毕业设计从理论上深入学习了解M3白血病有关概念、发病原因、临床表现、检验方案等，实践上掌握了血液标本采集、保存、处理方法、血液检查技能、检测结果分析、正确书写检验报告，提高自身的思维能力、创新能力及实践能力。该患者骨髓象骨髓增生明显活跃，粒系异常增生，以异常早幼粒为主，淋巴细胞明显降低，血小板减少，嗜酸性粒细胞下降出现贫血符合急性早幼粒细胞白血病。如果要进一步查明病因，需要做细胞免疫学检查，细胞遗传学检查，染色体检测等。在实际检验中，当血液自动分析仪检测结果异常时要加做显微镜镜检以免漏检和误检。