苏ICP备112451047180号-6
比较梅毒血清学检验的不同检测方法
摘要：目的 比较常用三种梅毒血清学试验方法，观察各种方法诊断符合率，为检验与临床提供参考。方法 应用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、梅毒酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测血清标本中的梅毒螺旋体抗体。结果 TRUST,TPPA,ELISA 的阳性率分别为81.23% ,97.21% ,99.12%。特异性分别为78.86% ,96.57% ,90.86%。同时发现ELISA 检测时存在假阳性。结论 不同梅毒检测方法敏感性和特异性不尽相同，通过对3 种检测方法的比较分析，在进行梅毒的诊断和治疗中，应联合使用不同的梅毒血清学方法进行检测。
关键词：梅毒螺旋体；ELISA；TPPA；TRUST
近年来，我国梅毒的发患者数呈急剧上升趋势，严重危害了人类和社会的健康。它几乎可以累及全身各个器官，病程长，危害大，临床表现复杂，呈多样性，很容易漏诊和误诊。为提高梅毒的诊断率，本文对TRUST , TPPA , ELISA 3 种不同梅毒检测方法进行比较。
1 材料与方法
1.1 血清标本
150 例梅毒患者来自我院门诊和住院病人，经临床确诊的梅毒患者，其中一期48 例，二期102 例。150 例非梅毒患者均来自我院住院病人，其中SLE 患者25 例，妊娠孕妇24例，肝炎患者2S 例，类风湿性关节炎18 例，脑血栓15 例，冠心病15 例，肿瘤8 例，正常人20 例。
1.2 器材
TRUST 试剂由上海荣盛生物技术有限公司提供;TPPA试剂由日本富士瑞必欧株式会社公司提供;ELISA 试剂由中山生物工程有限公司提供。上述试剂均在有效期内使用。仪器：酶标仪; 洗板机; 振荡器。
1.3 方法
首先应用ELISA 法和TPPA 法对样本同时进行检测，再对ELISA 法和TPPA 法阳性标本用TRUST 法检测其滴度。严格按照各种试剂盒提供的说明书操作，并在有效期内使用。结果判断:ELISA 法严格按照说明书计算公式由酶标仪进行检测，样本A 值大于或等于临界值为阳性，小于临界值为阴性;TRUST 和TPPA 严格按照说明书规定的时间范围内判定结果。
1.4 统计学处理
使用统计学软件 SPSS13.0 对率与率之间的比较进行卡方检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三种方法检测150 例梅毒血清抗体结果
TRUST 有151例阳性，阳性率为81.23% ；ELISA 有171 例阳性，阳性率为97.21%；TPPA 有178 例阳性，阳性率为99.12% ；TRUST 的假阴性为13. 33% , ELISA 的假阴性为1.11 % ,TPPA 的假阴性为1.67%。
2.2 三种方法检测150 例非梅毒患者血清结果
TPPA 阳性6例，阴性169 例，ELISA 阳性16 例，阴性159 例，TRUST 阳性37 例，阴性138 例，TRUST 的特异性为78.86% , ELISA 的特异性为90.86% ,TPPA 的特异性为l6.57%。
2.3 三种方法的两两比较
2.3.1 TPPA法与ELISA法的检测结果比较
用TPPA 法检测出的244 份阳性标本中ELISA 法均为阳性，有3 例ELISA 法阳性标本TPPA 法检测结果为阴性，符合率98.78%，两种方法检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3.2 TRUST法与ELISA法的检测结果比较
TRUST 法检测的阳性为136 份， 与ELISA 法的符合率为55.06%。 TRUST 法与ELISA 法检出率比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.3.3 TPPA法与TRUST法的检测结果比较
对TPPA 确证的244 份阳性标本，用TRUST 法检测出136 份阳性，符合率55.74%。 TRUST 法与TPPA 法检出率比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
梅毒检测早已被卫生部列为输血前必须筛查的项目之一。近年来，梅毒的发病率逐年增高，已经成为主要的性传播疾病及传染病高发病种。本文研究也发现本院住院患者输血前筛查和性病门诊的梅毒阳性率高达3.69%，比文献报道的偏高。其可能为本院性病门诊是性病、艾滋病监测哨点，疑似患者占相当大比例的原因。
TPPA 为近年来临床常用的梅毒确诊实验。具有很高的特异性和灵敏度。它是将提纯的梅毒螺旋体特异性抗原包被在明胶颗粒上，当抗原与血清中的抗体发生特异性反应时就会出现颗粒凝集现象，凝集的强弱与抗体浓度成正相关。本文测定显示TPPA 的敏感性为98.33%，特异性为96.57%，与文献报道相一致，但由于TPPA 操作较复杂，试剂昂贵，结果判断难以自动化，不适合大规模的血液筛查。
ELISA 是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔，并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性抗体，对梅毒各期的检出率都较高。本组表明ELISA 有很高的敏感性和特异性，分别为98.89% 和90. 86%，与TPPA 非常接近。而ELISA 操作标准简便，通过酶标仪可直接读取数据，克服了肉眼难以判断结果的缺点，减少了人为操作和判断失误，价格适中。而且本组说明了不存在ELISA 阳性TPPA 阴性的标本，即ELISA 的假阴性率很低，本文的假阴性率仅为1.11%，与文献报道基本一致。故认为ELISA 适合手术前检查和输血等大批量样本的筛查试验[1-2]。
本文结果显示TRUST 法与ELISA 法、TPPA 法符合率分别为 55.06% 和55.74%，在108 份ELISA 法和TPPA 法检测为阳性的标本，TRUST 法检测为阴性，可认为是梅毒非活动期或部分患者治疗后转阴。由于TRUST 试验在梅毒诊断上出现较高的假阳性和假阴性结果，容易导致误诊或漏诊，故TRUST 试验不适用于梅毒的筛查试验。但在临床治疗方面，TRUST 试验滴度与病程有关，当感染者在接受治疗后或处于非活动期时，其滴度下降或出现阴性结果，而梅毒复发或治疗无效时，滴度会因此而升高，所以通常检测其滴度变化以作为疗效观察、复发或再感染的指标。
TPPA 和ELISA 两种特异性方法的比较。对133 例ELISA 阳性和150 例ELISA 阴性的标本进行TPPA 检测时发现8 例ELISA 阳性而TPPA 阴性，并对8 例患者进行临床追踪调查，发现3 例为肝炎，2 例为妊娠孕妇，1 例为肿瘤,2例为类风湿性关节炎，没有梅毒患者。这表明ELISA 法存在假阳性。但没有发现ELISA 检测阴性而TPPA 阳性的标本。
结论
综合上面的结果分析，我们认为对手术前检查和输血等大批量样本的筛查试验时，若ELISA 检测为阳性时应进一步做TPPA 确认。而对ELISA 检测阴性的标本不需要再做TPPA 确认。基于以上观点，3 种梅毒检测方法较合理的检测顺序为:先用ELISA 法初筛，如果出现阳性应同时做TRUST 滴度和TPPA 确证试验。这将对梅毒早期诊断、治疗及控制其蔓延起到至关重要。